黄瓜α-半乳糖苷酶-EGFP融合表达载体的构建

[目的]构建由CaMV 35S启动子调控的黄瓜α-半乳糖苷酶的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green flurescent protein,EGFP)融合表达载体。[方法]运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,分别以质粒pCambia 1303和pEGFP-N1为模板扩增CaMV35S启动子序列和EGFP编码序列;运用反转录聚合酶链式反应(Reverse transcript-PCR,RT-PCR)技术,以黄瓜总RNA为模板扩增黄瓜酸性α-半乳糖苷酶Ⅰ编码序列;将上述3个片段插入表达载体pCambia 1381*c的多克隆位点,构建EGFP位于目的基因C端的α-半乳糖苷酶基因的EGFP融合表达载体。[结果]经酶切、测序等验证,黄瓜α-半乳糖苷酶-EGFP融合表达载体构建成功。[结论]为进一步研究黄瓜α-半乳糖苷酶的亚细胞定位奠定基础。