单核增生李斯特菌Internalin A的克隆表达与抗体制备

被引：5

作者：

彭珍

魏华

万翠香

熊勇华

赖卫华

徐锋

机构：

[1] 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室

来源：

中国微生态学杂志 | 2009年 / 21卷 / 12期

关键词：

单核增生李斯特菌; InlA; 纯化; 抗血清; 特异性;

D O I：

10.13381/j.cnki.cjm.2009.12.002

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的克隆表达单核增生李斯特菌Internalin A(InlA),并以之为抗原制备检测单核增生李斯特菌的抗体。方法通过PCR技术从单核细胞增生李斯特菌4b中扩增出inlA基因,克隆筛选和测序鉴定后,最终构建该基因的原核表达质粒pGEX-4T-InlA,谷胱甘肽树脂亲和层析纯化表达产物后,免疫小鼠分别制备相应的多抗和单抗。结果在大肠埃希菌中成功表达了InlA,并对其进行了纯化,融合表达产物分子量约为110 kD;免疫小鼠获得的抗血清效价达到1∶1600;得到了3株抗InlA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗效价为1∶1×1051∶3×105。2种抗体与其他病原菌均无交叉反应。结论通过表达单核增生李斯特菌的特异性蛋白制备的抗体,能有效地消除交叉反应,提高检测的特异性。

引用

页码：1073 / 1076

页数：4

共 5 条

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