蛇毒心脏毒素诱导肺癌A549细胞的凋亡机制研究

目的:研究眼镜蛇心脏毒素(CTX)诱导肺癌A549细胞凋亡的机制。方法:MTT法测定CTX体外细胞毒性作用;吉姆萨染色法观察CTX对A549细胞形态学的影响;线粒体膜电位(JC-1)法检测CTX诱导A549细胞后细胞JC-1的变化;流式细胞仪检测CTX对A549细胞凋亡的影响;Western blot法测定细胞色素C、凋亡蛋白酶前体(Procaspase)-3、Procaspase-9的表达;通过S180小鼠肉瘤模型检测CTX体内抗肿瘤活性。结果:CTX作用于A549细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.770μg/ml;0.5、1.0、2.0μg/ml CTX可引起A549细胞明显缩小,在高倍镜下可观察到胞核皱缩,形成染色质边集等形态学改变;流式细胞仪检测到CTX使A549细胞出现凋亡,并且具有量效关系;5μg/ml CTX作用于A549细胞0.5 h可使细胞JC-1降低;胞浆中检测到细胞色素C时,Procaspase-9的含量没有明显变化,随后逐渐减少,CTX诱导细胞凋亡具有时效关系;体内抑瘤实验显示在剂量为0.5、1.0、2.0 mg/kg时CTX对A549细胞有明显的抑制作用。结论:CTX对A549细胞有细胞毒性,可以使线粒体内细胞色素C释放,并激活Procaspase-9和Procaspase-3诱导A549细胞的凋亡。