前列腺特异性膜抗原基因复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达

被引：2

作者：

王可兵

高新

庞俊

刘小彭

张炎

湛海伦

机构：

[1] 中山大学附属第三医院泌尿外科

来源：

中华泌尿外科杂志 | 2008年 / 03期

关键词：

前列腺特异性膜抗原; 腺病毒载体; 同源重组;

D O I：

暂无

中图分类号：

R6 [外科学];

学科分类号：

100210 [外科学];

摘要：

目的构建携带前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其在真核细胞中的表达。方法利用质粒pET-30a-PSMA行PCR扩增、酶切获得PSMA cDNA片段,并插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV- PSMA,线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-PSMA,经293A细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-PSMA。将Ad-PSMA体外感染DU145细胞,蛋白质印迹法检测目的基因表达。结果构建了携带PSMA基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度1.4×10～9 pfu/ml,能有效感染DU145细胞,转染率约95%,并经蛋白质印迹法检测到相对分子质量约100 000的目的蛋白PSMA在DU145中表达。结论成功构建了表达PSMA基因的复制缺陷型腺病毒载体,为开展靶向PSMA的基因免疫治疗提供了实验基础。

引用