分泌蛋白MPT64鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究

目的构建重组MTB分泌蛋白MPT64,制备多克隆抗体,评价其在鉴定MTB复合群中的应用价值。方法通过PCR扩增mpt64基因,构建pET21a-mpt64重组质粒;纯化重组蛋白并免疫兔制备多克隆抗体;纯化和标记抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法;检测分枝杆菌标准菌株和临床分离株培养液中MPT64蛋白,抽提样本基因组扩增mpt64基因。结果成功构建重组质粒,纯化重组蛋白并制备多克隆抗体,检测抗体浓度为0.85 g/L,ELISA法检测敏感度为0.01mg/L,MTB复合群中H37Rv、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌为阳性,24株非MTB均为阴性;mpt64基因扩增的结果与ELISA法检测结果完全相符。ELISA法检测MTB临床分离株的敏感度为97.3%（110/113）,57株非MTB均未检出MPT4蛋白,检测特异度为100.0%。基因扩增MTB中2株为阴性,非MTB均为阴性。结论采用ELISA法检测分泌蛋白MPT64来鉴定MTB复合群,是一种准确、快速和简便的方法,值得临床推广应用。