间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞 IBRS- 2增殖猪伪狂犬病病毒 (PRV)鄂 A株 ,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇(Mr2 0 0 0 0 )浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清 Ig G免疫家兔 ,HRP标记提取的兔抗猪 Ig G,制备出高效价的酶标抗体 ,酶标抗体工作浓度为 1∶ 5 0 0 0 0 ;经各种条件的选择 ,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接 EL ISA。所建立的间接 EL ISA抗原包被浓度为 39.2 mg/ L ,血清最佳稀释度为 1∶ 2 0 ,与猪细小病毒、猪瘟、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应 ,与标准阴性血清和临床未感染 PRV的猪血清呈阴性反应 ;与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应 ;与美国进口的 PRV抗体检测 EL ISA诊断试剂盒检测结果比较 ,45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为 10 0 %。表明建立的间接 EL ISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。