目的建立以反相高效液相色谱法测定烟叶提取物中茄尼醇含量及提取、纯化高纯度茄尼醇的方法。方法色谱柱为C8,流动相为甲醇-乙腈(95∶5),检测波长为210nm,流速为1.0ml/min,柱温为25℃;按提取、分离、纯化步骤得到提取物样品并测定其中茄尼醇含量。结果茄尼醇检测浓度在1.14~114.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9998,n=6),平均加样回收率为99.2%(RSD=1.5%);不同分离纯化方法所得茄尼醇含量不同(28.7%99.2%)。结论含量测定方法准确性、重现性均良好,且简便快速;所建立的分离纯化方法可得到高纯度茄尼醇。