苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关基因rstA在大肠杆菌中的高效表达及其产物的纯化

被引：2

作者：

葛世超

王磊

李小红

亓苏伟

杨苏声

机构：

[1] 中国农业大学生物学院微生物学系农业部微生物资源及其应用重点实验室

[2] 中国农业大学生物学院微生物学系农业部微生物资源及其应用重点实验室北京

[3] 北京

来源：

微生物学报 | 2005年 / 03期

关键词：

苜蓿中华根瘤菌; 耐盐; 表达; 纯化;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.2005.03.028

中图分类号：

Q943.2 [植物基因工程];

学科分类号：

071007 ; 090102 ;

摘要：

苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BM与耐盐有关的1 9kbDNA片段含有两个开放阅读框,采用PCR方法分别将它们扩增,连接到穿梭质粒上,并进行了耐盐功能检测,证明其中的ORF2具有耐盐性,定名为rstA基因。将它分别克隆到表达载体pThio HisA、B和C上,构建成重组质粒pGSA、pGSB和pGSC ,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)Top10后,经IPTG诱导,pGSA获得高效表达。表达蛋白占菌体总蛋白的36 % ,但大多数以包涵体形式存在。对表达产物依次进行ProBondTM树脂亲和纯化、饱和硫酸铵盐析,最后得到纯度为95 %的融合蛋白。SDS PAGE显示纯化的蛋白质为分子量4 3kD的单一蛋白带,经Westernblot检测证实了表达结果

引用

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