检测人端粒酶活性的端粒酶TRAP-ELISA法的建立

目的为改进端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）存在定量困难、应用同位素及每次检测标本数受限等缺点，研究建立及评价端粒酶ＴＲＡＰ ＥＬＩＳＡ法。方法端粒酶ＴＲＡＰ ＥＬＩＳＡ法是将ＴＲＡＰ与ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ系统结合。与常规ＴＲＡＰ法相比较，应用端粒酶ＴＲＡＰ ＥＬＩＳＡ法检测端粒酶阳性的２９３细胞和阴性对照标本（加热或ＲＮａｓｅ处理和正常人内皮细胞）。结果２９３细胞端粒酶阳性，对１０，１０２，１０３及１０４个细胞检测均为阳性，所测到的吸光度值（Ａ，曾称光密度ＯＤ）依赖于被检２９３细胞数。ＲＮａｓｅ或加热处理标本和正常人内皮细胞均阴性。该方法可在当日观察结果，不需放射性同位素。结论端粒酶ＴＲＡＰ ＥＬＩＳＡ是一种非放射性同位素、快速及可定量的人端粒酶活性检测方法。