CTAB法高效提取苹果叶片DNA的研究

为研究CTAB法在正常条件和逆境条件下,从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的苹果树叶片中分离出高质量的基因组DNA,以抗旱能力较强的八棱海棠(Malus micromalusRehd.)和抗旱性较弱的平邑甜茶(Malus hupehensis pampReld.)幼苗为试验材料。用20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG6000)模拟干旱,采取CTAB提取缓冲液,按一定比例加入PVP和β-巯基乙醇,用Tris平衡酚-氯仿-异戊醇除去蛋白质及杂质,在粗提时用异丙醇沉淀DNA,并用DNA洗液(10 mmol/L醋酸铵,75%乙醇)洗涤DNA,在纯化时用乙醇沉淀DNA,且没有加入RNase去除RNA的方法,分别提取2个品种正常和干旱胁迫的苹果属叶片总DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测。结果表明:此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,得到高质量、特征带形清晰的大量DNA。并就提取过程中遇到的问题,提出了相应的解决办法。