淫羊藿甙对MC3T3-E1细胞Smad1,5作用的实验研究

目的检测淫羊藿甙(jcariin,ICA)对MC3T3-E1中Smad1,5 mRNA及蛋白的影响。方法DMEM高糖、胎牛血清培养下的MC3T3-E1细胞按ICA刺激浓度0、10、40及80 ng/ml分为四组,各组接种于6孔板中,接种细胞数目约为3×10～5个/孔,分别于给药后24、48及72 h,用半定量RT-PCR技术测定Smad1,5 mRNA的量,以Western blot评价Smad1,5蛋白的量。并于给药72 h后用免疫组织化学定位Smad1,5蛋白的表达。采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果 RT-PCR显示ICA刺激24 h后,0、10、40、80 ng/ml各组Smad1,5 mRNA量的表达无统计学差异;刺激48 h后,0 ng/ml组Smad1mRNA表达量检出极少,Smad5 mRNA未检出;至72 h时,0 ng/ml组二者均未检出,而10、40、80 ng/ml各组在刺激48、72 h时,Smad1,5 mRNA保持较高水平,各组Smad1,5 mRNA的表达量较0 ng/ml组具有统计学意义。Western blot蛋白印迹显示10、40、80 ng/ml各组的Smad1蛋白表达于不同时间点较0ng/ml组明显增加,0 ng/ml组仅于刺激72 h后少量检出,Smad5蛋白表达除0 ng/ml组外,于10、40、80ng/ml各组在不同时间点均有检出,较0 ng/ml组具有统计学意义。免疫组织化学显示10、40、80 ng/ml组,于胞质及核内Smad1,5蛋白的表达较0 ng/m组均增多。结论淫羊藿甙可能通过上调Smad1,5mRNA及蛋白的表达来促进成骨细胞分化。