p14ARF基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的 :从正常人肝细胞系L0 2细胞中扩增人的肿瘤抑制基因 p14 ARF,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法 :应用RT -PCR技术 ,从培养的正常人肝细胞系L0 2细胞中扩增出 0 .4Kb的p14 ARFcDNA片段 ,测序正确后插入真核表达载体 pcDNA3上的BamHI和EcoRI位点 ,命名为 pcDNA3ARF。此质粒由脂质体Lipofec tamineTM介导转染肿瘤细胞Hep2、KB、KB -v2 0 0、HepG2、HLE、Huh7以及MCF7和MCF7/ADR ,经G4 18筛选 2周后统计形成的集落数。结果 :经抗生素G4 18筛选 2周后 ,发现p5 3阳性的肿瘤细胞HepG2、Hep2、MCF7形成的集落数较少 ,分别为 5 9± 2 .1,60± 2 .1和 66± 7.0 ,占各自对照组的 4 7% ,5 7% ,5 8% ;而 p5 3异常的肿瘤细胞KB ,HLE ,Huh - 7,则形成相对较多的集落 ,分别为 91± 2 .5 ,4 8± 2 .0 ,4 1± 2 .0 ,占各自对照组的 74 % ,65 % ,80 % ,但是二种p5 3异常的耐药肿瘤细胞株KB -v2 0 0和MCF7/ADR ,形成的集落数最少 ,分别为 13± 2 .0和 2 1± 1.5 ,占各自转染空载体 pcDNA3的对照组的 15 %和 17%。 结论 :p14 ARF能明显抑制 p5 3阳性肿瘤细胞的生长 ,具有 p5 3相关性 ;然而 p14 ARF对 p5 3阴性的耐药肿瘤细胞却具有强烈的抑制作用 ,由此提示 :p14 ARF抑制耐药肿瘤细胞的生长是 p5 3非依赖性的