MES23.5细胞酪氨酸羟化酶的种属来源及其重组酶的活性测定

被引：10

作者：

于泓

李尧华

冯秀丽

吴燕川

周虹

陈彪

机构：

[1] 首都医科大学宣武医院,首都医科大学宣武医院,首都医科大学宣武医院,首都医科大学宣武医院,哈尔滨医科大学生物化学教研室,首都医科大学宣武医院北京老年医学研究所,北京,哈尔滨医科大学生物化学教研室,哈尔滨,北京老年医学研究所,北京,北京老年医学研究所,北京,北京老年医学研究所,北京,哈尔滨,北京老年医学研究所,北京,国家人类基因组北方研究中心,北京

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2004年 / 01期

关键词：

MES23.5细胞系; 酪氨酸羟化酶; 克隆;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2004.01.019

中图分类号：

R341 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

MES 2 3 5细胞作为研究神经变性疾病的工具 ,是一种杂交瘤性多巴胺能神经元细胞系 ,由大鼠胚胎中脑细胞与小鼠神经母细胞瘤胶质瘤细胞系N18TG2杂交而成 .其酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase ,TH)的动物种属来源不清楚 .应用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)法从MES 2 3 5细胞系中克隆了编码TH的cDNA ;结构分析表明 ,其cDNA编码区由 14 97碱基构成 ,共编码 4 98个氨基酸 ,与大鼠和小鼠TH的同源程度分别为 93%和 10 0 % .该杂交瘤细胞系表达小鼠TH .将该cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX 4T 1,经原核细胞表达、亲和层析得到了电泳纯的基因重组小鼠TH(recombinantmousetyrosinehydroxylase ,rmTH) .改良和建立了一种体外分析TH活性的新方法 .活性分析证明 ,纯化的rmTH能催化L 酪氨酸发生加单氧反应生成L 3,4 二羟基苯丙氨酸 (L 多巴 ) .rmTH的表观分子量为 5 6kD ;其酶促加单氧反应的最适pH值为 7 0 .乙二胺四乙酸能显著抑制此酶的活性 ,而亚铁离子能明显增强其活性 .

引用

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