怀地黄ISSR扩增条件优化的研究(英文)

被引：55

作者：

周延清

景建洲

李振勇

浩健

贾敬芬

机构：

[1] 西北大学生命科学学院,华美生物工程公司博士后工作站,华美生物工程公司博士后工作站,华美生物工程公司博士后工作站,西北大学生命科学学院西安,河南洛阳,河南洛阳,河南洛阳,西安

来源：

西北植物学报 | 2004年 / 01期

关键词：

怀地黄; ISSR; PCR; 条件优化;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q943 [植物细胞遗传学];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

用CTAB法提取怀地黄嫩叶DNA,进行简单重复间序列标记 ISSR 分析.通过单因子实验分别研究了退火温度、Taq酶单位、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR反应的影响,找出各自的合适条件,而且每一个合适条件确定以后都被作为后续研究的一个条件.通过各个因子的组合研究建立了适宜于怀地黄ISSR分析的扩增体系:25μLPCR反应体积,1×TaqDNA酶缓冲液 10mmol/LTris-HCl,50mmol/LKCl,0.1%TrionX-100,pH9.0 ,2.5mmol/LMgCl2,1.5～1.0UTaq酶,60ng模板DNA,0.4μmmol/L引物,各0.4mmol/L的dATP、dGTP、dCTP和dTTP.合适的退火温度为53～55℃.为用ISSR技术分析鉴定怀地黄种质资源奠定了良好的基础.

引用

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共 7 条

[1]

适合于苹果的ISSR反应体系的建立 [J].