糖基化终产物诱导视网膜微血管内皮细胞VEGF和ZO-1 mRNA合成的变化

目的观察糖基化终产物(advanced glycosylation end products,AGEs)作用下,大鼠视网膜微血管内皮细胞(rat retinal microvascular endothelial cells,rRMEC)的增生和活力的变化,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)合成和紧密链接蛋白-1(zonula occludens protein-1,ZO-1)mRNA合成的变化。方法采用免疫磁珠法分离培养rRMEC,0mg·L-1、10mg·L-1、100mg·L-1和600mg·L-1糖基化牛血清白蛋白(AGE-bovine serum albumin,AGE-BSA)作用rRMEC,观察4d内细胞增生变化,并采用台盼蓝染色法测定细胞活力。不同浓度的AGE-BSA(0mg·L-1、10mg·L-1、50mg·L-1、100mg·L-1、200mg·L-1、400mg·L-1、600mg·L-1)作用12h,100mg·L-1的AGE-BSA作用不同时间(0h、2h、4h、6h、12h、24h)后,采用RT-PCR和Elisa测定rRMEC中VEGFmRNA、ZO-1mRNA和上清中VEGF含量。结果rRMEC在0mg·L-1、10mg·L-1和100mg·L-1AGE-BSA环境中可以继续增生,600mg·L-1细胞增生可能受到抑制,造成rRMEC活力降低。在浓度为10～400mg·L-1AGE-BSA作用12h时,VEGFmRNA合成增强,上清液中VEGF蛋白表达升高;在100mg·L-1AGE-BSA作用2～24h,VEGFmRNA合成首先升高,后降低并趋于稳定;作用后各组均高于作用前(P<0.01),上清液中VEGF蛋白表达随时间延长逐渐增加。随AGE-BSA浓度的增加,ZO-1mRNA逐渐降低;随AGE-BSA作用时间的延长,ZO-1mRNA逐渐降低。结论在一定范围内,VEGFmRNA和ZO-1mRNA合成呈AGE-BSA剂量和时间依赖性。VEGF可能是促进rRMECZO-1mRNA合成降低的重要因素之一。