链置换扩增技术的影响因素研究

被引：3

作者：

蒋天伦

府伟灵

张波

陈鸣

张雪

赵树铭

机构：

[1] 第三军医大学附属西南医院检验科

[2] 第三军医大学附属西南医院输血科重庆

[3] 重庆

来源：

第三军医大学学报 | 2002年 / 01期

关键词：

链置换扩增; 等温扩增; 核酸; 结核菌;

D O I：

10.16016/j.1000-5404.2002.01.018

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的　探索限制酶、聚合酶、缓冲体系和DTT等对链置换扩增 (SDA)实验的影响 ,以期在商品化试剂条件下组建SDA系统。方法　以结核菌IS61 1 0序列为扩增对象设计SDA引物 ,利用商品化的BsoBI和exo Bst为实验用酶建立SDA实验系统。对比在不同BsoBI、exo Bst浓度条件下SDA产物的电泳条带亮度来观察限制酶、聚合酶对SDA效率的影响 ;对比SDA在pH 7.6的磷酸盐缓冲液和以Tris HCl为缓冲体系的NEBuffer2、ThermoPolBuffer和EcoPolBuffer中的产物电泳条带的方法来观察不同缓冲体系对SDA效率的影响 ;对比加入DTT和不加DTT时SDA产物的电泳条带亮度来观察DTT对SDA效率的影响。结果　①在 0 .1～ 0 .4U μl浓度范围内 ,SDA的扩增率与BsoBI含量正相关 ,而 0 .8U μlBsoBI反而使SDA受到抑制。②在 0 .0 8～ 0 .3 2U μl浓度范围内exo Bst用量对SDA的扩增能力没有显著影响 ;③SDA可以在pH 7.6的磷酸盐缓冲液和ThermoPolBuffer中进行 ,而不能在NEBuffer2和EcoPolBuffer中进行 ;④DTT对SDA的扩增率和特异性都没有显著影响。结论　以上实验结果表明在商品化试剂条件下可以构建SDA系统 ,并得到良好的扩增效果

引用

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