目的观察五福饮含药血清对大鼠软骨细胞肿瘤坏死因子-α诱导凋亡软骨细胞活性、胶原蛋白(Collagen)II、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响,探讨其防治骨性关节炎作用机制。方法应用随机数字表法将30只2月龄Wistar大鼠分为生理盐水组(生理盐水灌胃)、硫酸氨基葡萄糖组(硫酸氨基葡萄糖灌胃)、五福饮组(五福饮灌胃),每组10只,经干预后取得相应血清。用Ⅱ型胶原酶消化法获取2月龄SD大鼠膝关节软骨细胞,应用随机数字表法将大鼠软骨细胞分为:空白组:采用0μg/L肿瘤坏死因子(TNF)-α+10%生理盐水组血清;模型组:采用20μg/L TNF-α+10%生理盐水组血清;对照组:采用20μg/L TNF-α+10%硫酸氨基葡萄糖组血清;观察组:采用20μg/L TNF-α+10%五福饮组血清。干预48h后检测软骨细胞Collagen II表达,软骨细胞凋亡、增殖及MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达。结果 Collagen II的平均荧光表达值:空白组(70.92±3.72),模型组(43.39±1.52),对照组(62.92±5.32),观察组(53.33±2.33)。模型组、对照组和观察组显著低于空白组(P<0.05,P<0.01);对照组和观察组高于模型组(P<0.05,P<0.01)。软骨细胞凋亡:模型组凋亡率最高,对照组与观察组凋亡率接近,低于模型组,高于空白组。软骨细胞增殖能力吸光度(OD)值:给药24、48、72h后,模型组、对照组、观察组软骨细胞OD值均低于空白组[24h:(0.297±0.014)、(0.342±0.021)、(0.316±0.028)比(0.396±0.017);48h:(0.333±0.021)、(0.414±0.029)、(0.394±0.028)比(0.470±0.018);72h:(0.361±0.014)、(0.510±0.035)、(0.493±0.030)比(0.570±0.031),P<0.05,P<0.01],观察组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);给药48、72h后,与模型组比较,对照组和观察组软骨细胞OD值均升高(P<0.05,P<0.01)。MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达:与空白组比较,模型组、观察组MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA水平显著升高[MMP-3:(2.610±0.328)、(1.994±0.134)比(1.003±0.091);MMP-9:(2.519±0.195)、(2.000±0.053)比(1.033±0.300);MMP-13:(2.491±0.300)、(1.688±0.012)比(1.012±0.200),P均<0.01],对照组MMP-9 mRNA水平亦升高[(1.866±0.151)比(1.033±0.300),P<0.05]。与模型组比较,对照组和观察组MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA水平明显下降[MMP-3:(1.313±0.335)、(1.994±0.134)比(2.610±0.328);MMP-9:(1.866±0.151)、(2.000±0.053)比(2.519±0.195);MMP-13:(1.449±0.289)、(1.688±0.012)比(2.491±0.300),P<0.05,P<0.01]。与对照组比较,观察组MMP-3 mRNA水平显著升高(P<0.01),MMP-9、MMP-13 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论五福饮能延缓肿瘤坏死因子-α诱导引起的大鼠软骨细胞凋亡,其机制可能与抑制MMP-3、MMP-9、MMP-13等基质金属蛋白酶表达相关。
