人三叶因子3在毕氏酵母中的表达及生物活性分析

利用PCR方法在人胎儿胎盘cDNA中扩增了人三叶因子 3基因 (hTFF3) ,插入到含有AOX1启动子和α 因子信号肽序列的表达载体 pPIC9K中 ,采用毕氏酵母表达系统对其进行了高效的分泌表达 ,并用G418筛选高拷贝整合转化子。2 %甲醇诱导酵母表达 48h后 ,上清经SDS PAGE和Western印迹证明重组蛋白质以双体的形式分泌表达 ,占总蛋白质的 45 % ,能被抗hTFF3抗体所识别。表达产物经S Sepharose、Q Sepharose离子交换及SephacrylS 10 0纯化后纯度达到 95 %以上。体内生物学活性研究证实hTFF3可有效的防止盐酸诱导的大鼠胃溃疡。