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人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达
被引：35
作者：
贝锦龙
陈庄
杨林
廖玲
王珣章
蒋宗勇
机构：
[1] 中山大学生物防治国家重点实验室生物医药中心！广州
[2] 广东省农业科学院畜牧研究所!广州
[3] 广东省农业科学
来源：
基金：
广东省自然科学基金;
关键词：
基因人工合成;
植酸酶基因phyAas;
基因克隆;
毕赤酵母表达系统;
D O I：
10.13345/j.cjb.2001.03.007
中图分类号：
Q786 [基因的表达];
学科分类号：
摘要：
本文以黑曲霉 (Aspergillusniger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象 ,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列 ,换用在毕赤酵母 (Pichiapastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因 (PhyA as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合入酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS PAGE结果与表达产物酶学性质研究表明植酸酶得到分泌表达 ,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌 ,其中SPAN Ⅲ菌株达到了在摇床培养条件下 ,每毫升发酵液产生 16 5 0 0 0u植酸酶的水平 ,基本满足工业化生产的要求
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