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VEGF的单抗制备及胃癌细胞MGC803表达VEGF的鉴定
被引：7
作者：
田学军
吴健
孟麟
寿成超
董志伟
机构：
[1] 北京市肿瘤研究所北京医科大学临床肿瘤学院
[2] 中国医学科学院肿瘤研究所
来源：
关键词：
胃肿瘤,血管内皮细胞生长因子,抗体.单克隆;
D O I：
暂无
中图分类号：
学科分类号：
摘要：
目的从胃癌细胞ＭＧＣ８０３克隆并在体外表达血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ），利用ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体对其产物进行鉴定，为进一步明确肿瘤组织中ＶＥＧＦ来源，并以ＶＥＧＦ为靶点治疗肿瘤奠定基础。方法用杂交瘤技术制备ＶＥＧＦ１２１单克隆抗体（ＭｃＡｂ），通过ＥＬＩＳＡ、３Ｈ ＴｄＲ掺入检测其活性；用ＲＴ ＰＣＲ从ＭＧＣ８０３细胞克隆ＶＥＧＦ基因，与原核表达载体ＰＧＥＸ２Ｔ重组，在大肠杆菌中进行表达，以Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ对表达产物进行鉴定。结果所制备的ＶＥＧＦＭｃＡｂ能特异性地同ＶＥＧＦ结合，并能中和ＶＥＧＦ对内皮细胞的促增殖作用；利用ＲＴ ＰＣＲ扩增出特异的ＶＥＧＦ基因片段，重组到ＰＧＥＸ２Ｔ表达载体中，在大肠杆菌ＸＬ １ｂｌｕｅ中得到了稳定高效表达的蛋白产物，并能特异性地被ＶＥＧＦ抗体所识别。结论在ＭＧＣ８０３细胞中存在ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达，提示肿瘤细胞是肿瘤组织中ＶＥＧＦ的重要来源。ＶＥＧＦＭｃＡｂ不仅可对其存在进行检测，而且可有效抑制ＶＥＧＦ对内皮细胞的促增殖作用，可望在肿瘤治疗中发挥作用
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