人食管癌中缺失基因片段的分离和鉴定

目的克隆食管癌缺失的基因。方法采用简化的基因组消减杂交方法，从食管癌细胞系ＥＣ８７１２和ＥＣ８７３３中分离缺失的ＤＮＡ片段。继用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＰＣＲ技术检测这些片段在２０对食管癌及其癌旁组织标本中的缺失。结果获得７条食管癌细胞系缺失的基因片段，分别命名为１２Ｈ１、１２Ｈ２、３３Ｈ３、３３Ｈ４、１２Ｂ１、３３Ｂ２和３３Ｂ３。克隆测序后确定１２Ｈ１为５１２ｂｐ，１２Ｈ２为４２８ｂｐ，３３Ｈ３为５０９ｂｐ，３３Ｈ４为３５５ｂｐ，１２Ｂ１约为６８０ｂｐ（部分测序），３３Ｂ２为５１９ｂｐ，３３Ｂ３为４２５ｂｐ。同源性比较发现１２Ｈ１与３３Ｈ３互补同源，且与人基因组中定位于４Ｐ一新的核苷酸序列９８％同源。３３Ｈ４与定位于人１７号染色体上的α卫星序列８７％同源。１２Ｂ１与人Ｌ１家族中具有转座功能且带有开放阅读框的成员９０％同源。１２Ｈ２、３３Ｂ２和３３Ｂ３在基因库中尚无同源序列。这些片段在食管癌组织中的缺失频率为２０％～６０％，癌旁组织中为１０％～２０％。结论３３Ｈ４可能伴随食管癌中关键基因的缺失而缺失，１２Ｂ１通过转座作用抑制肿瘤的发生，而１２Ｈ１／３３Ｈ３、１２Ｈ２、３３Ｂ２和３３Ｂ３为食管癌的候选抑癌基