共 1 条
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基因工程原理.[M].吴乃虎编著;.科学出版社.2001,
p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析
被引：2
作者：
周素芳
王欣
陈虹
黄秉仁
机构：
[1] 广西医科大学生化教研室,中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所,国家医学分子生物学重点实验室,中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所,国家医学分子生物学重点实验室,中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所,国家医学分子生物学重点实验室北京,北京,北京
来源：
关键词：
神经生长因子低亲和力受体;
Fc融合蛋白;
基因表达;
毕赤酵母;
D O I：
10.13865/j.cnki.cjbmb.2004.05.008
中图分类号：
Q819 [生物工程应用];
学科分类号：
090105 [作物生产系统与生态工程];
摘要：
为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815 3α factor p75NTR Fc .重组质粒电转化酵母GS115细胞后摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达的融合蛋白经ProteinA亲和层析和SephadexG 10 0纯化 ,Western印迹、N末端测序进行蛋白质鉴定 ,ELISA及细胞培养进行生物活性分析 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中 ,诱导第 4d的表达量最高 ,占上清总蛋白 6 0 %以上 ,ProteinA纯化后有 2条蛋白带 ,免疫印迹分析这 2条蛋白带均能和抗p75及抗IgG抗体结合 ,N末端序列测定证实 1条为完整p75NTR Fc ,1条为其蛋白酶降解带 .ELISA等分析表明 ,p75NTR Fc能与NGF结合 ,p75NTR Fc能抑制NGF对PC12细胞的分化作用 .
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