绞股蓝抗TMV蛋白的分离及编码基因的序列分析

以半叶法测定抗烟草花叶病毒（Tobaccomosaicvirus,TMV）活性为监控手段,采用（NH4）2SO4分级沉淀、阳离子交换及亲和层析等方法,从绞股蓝（Gynostemmapentaphyllum）中分离到一种抗TMV蛋白,其分子量约为27kD,N端19个氨基酸残基为DINFSLAGADGQTYNTFIA（SWISS-PROT登录号为P83206）。N端序列分析表明,它是一种新的核糖体失活蛋白（ribosome-inactivatingproteins,RIPs）,命名为gynostemmin。gynostemmin与其它植物RIPs的N端同源性介于10%73%之间,其中Y14F17构成植物RIPsN端的“钉子”位点;gynostemmin与葫芦科植物RIPs的同源性为31%73%,其中F4L6A9Y14F17I186个残基为葫芦科植物RIPsN端“钉子”位点。根据N端序列和葫芦科植物RIPs下游保守氨基酸序列设计简并引物,采用PCR扩增并克隆了编码gynostemmin的基因,包含609个碱基,推导出的203个氨基酸残基约占成熟蛋白的75%,软件分析表明,它含有核糖体失活蛋白的活性位点区。