转雪花莲外源凝集素基因烟草对桃蚜的抑制作用

将编码雪花莲外源凝集素成熟蛋白的ｃＤＮＡＧＮＡ１２和其前体蛋白ｃＤＮＡＧＮＡ３４插入到二元载体ｐＢｉｎ４３８的双倍增强子ＣａＭＶ３５Ｓ启动子或二元载体ｐＢｃｏｐ１的ＣｏＹＭＶ启动子下游，分别构建成植物表达载体ｐＢＧｎａ１２、ｐＢＧｎａ３４、ｐＢＣＧｎａ１２和ｐＢＣＧｎａ３４。土壤农杆菌介导的转化再生植株的ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，ＧＮＡ基因已整合到烟草ＤＮＡ中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ｐＢＧｎａ３４和ｐＢＣＧｎａ３４的转基因植株能有效地表达外源ＧＮＡ，表达量约占可溶性总蛋白的００８％～０１５％，并且前体蛋白基因编码的蛋白在植物体内进行了正确的加工；而ｐＢＧｎａ１２和ｐＢＣＧｎａ１２的植株几乎检测不到外源ＧＮＡ的表达。有效表达外源ＧＮＡ的ｐＢＧｎａ３４和ｐＢＣＧｎａ３４的转基因植株具有较强的抗蚜活性，平均能够抑制桃蚜（Ｍｙｚｕｓｐｅｒｓｉｃａｅ）４５％～６０％蚜口密度，有的高达９０％以上。在转基因烟草中含双倍增强子的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与韧皮部特异表达的ＣｏＹＭＶ启动子介导ＧＮＡ基因表达具有相似的强度，但它们的抗蚜活性存在差异。