根据禽流感病毒H5、H9亚型的HA基因序列 ,设计了两对RTPCR引物 ,同时对H5、H9亚型进行了多重RTPCR扩增 ,得到了两条清晰的目的带。将目的带回收并进行测序 ,同源性比较结果证明其为禽流感H5、H9亚型的HA基因序列 ,作者对多重RTPCR进行反应条件优化以及敏感性与特异性测定 ,证明该方法的敏感性和特异性都比较好。初步应用于 30份临床病料 ,其检测结果与病毒的分离培养一致 ,比电镜和琼扩的检出率高 ,与其他NDV、IBV的病料无交叉反应 ,可用于禽流感病毒H5、H9亚型的鉴别诊断