实时定量聚合酶链反应检测腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的研究与评价

目的建立一种快速准确的分子生物学方法检测腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌,以替代繁琐费时的培养鉴定方法。方法应用针对致病性小肠结肠炎耶尔森菌染色体上yst基因而设计的特异引物和探针进行实时定量聚合酶链反应(PCR,探针法),检测致病性(7种血清型)和非致病性(5种)小肠结肠炎耶尔森菌、耶尔森菌属内的其他菌种(8种)及其他肠道细菌(8种)。此外,实时定量PCR检测经过培养方法鉴定的腹泻粪便200例,并比较两种方法的吻合度。结果引物和探针对致病性小肠结肠炎耶尔森菌100％特异,与其他细菌无交叉反应。在纯培养物和粪便中,最低检测浓度分别为102菌落形成单位(CFU)／ml和103CFU／g。在200例样本中,培养鉴定方法和实时定量PCR检出同样18例阳性样本,吻合度为100％。结论实时定量PCR反应对致病性小肠结肠炎耶尔森菌高度特异且与培养鉴定方法有很好的吻合性又方便快捷,可应用于临床检测。