目的:建立怀牛膝药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法:色谱柱为SHIMADZU shim-pack VP-ODS(250mm×4.6mm,5μm),柱温为30℃,流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0mL·min-1,检测波长为279nm。结果:建立了怀牛膝原药材和经硫磺熏制过的怀牛膝药材的指纹图谱。12批怀牛膝原药材有24个共有峰,其中9批药材的相似度都在0.9以上,另外3批的相似度较低;11批经硫磺熏制过的怀牛膝药材有20个共有峰,其中7批药材的相似度都在0.8以上,相似度较原药材低。结论:该方法简便、准确、专属性强,可用于怀牛膝药材的质量控制。