弓形虫cDNA文库的构建

目的：建立弓形虫ｃＤＮＡ文库。方法：用异硫氰酸胍酸性一步法提取弓形虫（ＲＨ株）ＲＮＡ，含ＰｏｌｙＵ的ｍＲＮＡ亲和膜分离Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ，进而合成双链ｃＤＮＡ。将ｃＤＮＡ与ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩ接头连接，再与表达载体λｇｔ１１ＤＮＡ臂连接，经体外包装，感染大肠杆菌Ｙ１０９０。以３２ｐ标记的弓形虫ＲＨ株基因组ＤＮＡ为探针，对重组噬菌斑进行原位杂交。结果：ｃＤＮＡ产物分布在０．５－２ｋｂ，得到６．９７×１０５重组子，重组率为９８．７３％，克隆效率为６．９７×１０６克隆／μｇｃＤＮＡ。噬菌斑原位杂交的阳性斑点占重组克隆９５．２％。结论：用异硫氰酸胍酸性一步法提取弓形虫ＲＮＡ简便有效，已建立了一个容量大、质量好的弓形虫ｃＤＮＡ文库。