新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型的分子鉴定

目的评价限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法检测α和 a 交配型位点内GEF1α/a 基因片段在鉴定新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型中的作用。方法筛选交配型位点内的 GEF1α/a 基因进行 PCR-RFLP 分析。根据各基因型和交配型参考株的 GEF1α/a 基因保守序列设计引物,扩增受试新生和格特隐球菌 GEF1α/a 基因部分片段。利用 DNAMAN 和 Vector NTI 软件进行序列比对、限制性图谱分析、限制性内切酶的筛选和模拟电泳。选择 EcoT14 Ⅰ和HapⅡ限制性内切酶分别对125株新生和格特隐球菌的GEt1α/a基因扩增片段进行 RFLP 分型。结果所有受试的82株新生隐球菌和43株格特隐球菌均扩增出1 300 bp大小片段,而罗伦隐球菌、白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、阿萨希毛孢子菌、烟曲霉和黄曲霉参考株均扩增阴性。RFLP 分型准确鉴定所有125株新生和格特隐球菌的种、变种、基因型和交配型。结论针对GEF1α/a基因片段的 PCR-RFLP 方法特异性高、稳定性好,适用于新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型的同步和快速鉴定以及进一步的分子流行病学分析。