硝酸还原酶的失活蛋白与抑制蛋白的关系

从小麦幼苗叶片中提取硝酸还原酶,通过亲和层析将酶高度纯化,又从小麦叶片中提取硝酸还原酶抑制蛋白,通过连续柱层析,将它纯化。纯化酶在室温下很快失活。将失活酶与抑制蛋白进行电泳,发现它们的Rm值相同。此外纯化酶在失活后具有抑制硝酸还原的作用。表明了失活蛋白就是抑制蛋白。用免疫双扩散方法看到失活蛋白的抗体与抑制蛋白会产生免疫沉淀。反之,抑制蛋白的抗体与失活蛋白也有免疫反应。进一步证明了此二种蛋白的同一性。研究抑制蛋白作用机理的结果看到这是一种竞争性抑制。它与活化的酶竞争着反应系统中NADH。从而设想酶蛋白有二个活性位点,在失活时,与NADH结合位点对温度较不敏感,仍有结合作用。但与硝酸盐结合位点失去了反应能力,这是失活蛋白具有抑制效应的原因所在。