高迁移率族蛋白B1真核表达载体的构建及其对肿瘤坏死因子-α报告基因活性的影响

被引：3

作者：

杨丽萍

姚咏明

李杰萍

叶棋浓

盛志勇

机构：

[1] 解放军总医院第一附属医院烧伤研究所

[2] 军事医学科学院生物工程研究所

来源：

中国中西医结合急救杂志 | 2008年 / 03期

关键词：

高迁移率族蛋白B1; 表达; 报告基因活性; 肿瘤坏死因子-α;

D O I：

暂无

中图分类号：

R459.7 [急症、急救处理];

学科分类号：

100231 [临床病理学];

摘要：

目的克隆人的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因,插入pc-DNA3载体中并检测其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)报告基因活性的影响。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出HMGB1基因,插入载体pc-DNA3中,确定所扩增的DNA序列;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)在293T细胞中检测其表达;应用报告基因方法检测其对TNF-α报告基因表达的影响。结果酶切和测序结果表明扩增的HMGB1序列正确,大小为648bp。在293T细胞中正确表达相对分子质量约24000的HMGB1蛋白。下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,构建的真核表达载体在内毒素刺激后以先增加后降低的方式影响TNF-α的活性,且对从95-120长度的TNF-α报告基因活性影响最明显。结论HMGB1以先增加后降低的方式影响TNF-α基因的表达,且主要通过26个碱基大小的片段发挥作用。

引用

页码：171 / 174

页数：4

共 4 条

[1]

高迁移率族蛋白B1的组织损伤效应及其干预途径 [J].

姚咏明 ;

徐珊 ;

盛志勇 .

中国医学科学院学报, 2007, (04) :459-465

[2]

大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1诱生机制的初步探讨 [J].

刘辉 ;

姚咏明 ;

于燕 ;

盛志勇 .

解放军医学杂志, 2004, (01) :39-41

[3]

脓毒症信号转导机制的现代认识.[J].姚咏明;盛志勇.中国危重病急救医学.2003, 01

[4]

High‐mobility group box 1 (HMGB1) protein at the crossroads between innate and adaptive immunity.[J].Marco E.Bianchi;Angelo A.Manfredi.Immunological Reviews.2007, 1

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