内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用。方法采用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型,分别于4、8、12、16周随机处死动物,留取血清和肝组织,同时设置正常对照组。检测大鼠血清总同型半胱氨酸(tHcy)浓度,比色法测定大鼠肝组织胱硫醚β合成酶(CBS)活性,逆转录-聚合酶联反应和免疫组织化学法分别检测肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP-78)、需钙蛋白酶2(calpain-2)和caspase-12前体蛋白(procaspase-12)的mRNA和蛋白质表达情况;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测肝细胞凋亡情况。组间数据比较用完全随机设计的方差分析(SNK法或Tamhane's法),相关性分析用Pearson直线相关分析法。结果模型组大鼠16周末出现肝细胞弥漫小泡性脂肪变性、窦周纤维化,汇管区纤维组织增生并有纤维间隔形成。正常对照组及造模4、8、12、16周时,大鼠血清tHcy浓度分别为(5.10±0.56)μmol/L、(6.95±0.17)μmol/L、(8.36±0.17)μmol/L、(9.45±0.28)μmol/L和(9.85±0.12)μmol/L,肝组织匀浆CBS浓度分别为(613.92±17.09)U/g、(573.53±24.96)U/g、(503.42±44.67)U/g、(438.02±14.67)U/g和(390.45±31.17)U/g,随着造模时间的延长,tHcy浓度逐渐升高(F=338.60,P<0.01),CBS活性逐渐降低(F=91.90,P<0.01),且二者呈负相关关系(r=-0.632,P<0.01)。随着造模时间的延长,GRP-78、calpain-2和caspase-12的mRNA相对表达量逐渐升高(F值分别为216.19、128.91和95.80,P值均<0.01),且GRP-78 mRNA的表达与tHcy浓度呈正相关(r=0.617,P<0.01);GRP-78和calpain-2的蛋白质表达量逐渐增多,procaspase-12的蛋白质表达量逐渐减少。正常对照组及造模4、8、12、16周的大鼠肝细胞凋亡指数分别为2.17%±1.06%、29.59%±2.62%、40.91%±4.70%、57.39%±6.13%和65.71%±9.78%,呈上升趋势(F=188.30,P<0.01)。结论肝细胞凋亡可能与CBS活性降低导致高同型半胱氨酸血症,从而诱发内质网应激,进而激活calpain-2和caspase-12的信号转导通路有关,这可能为酒精性肝病发病的重要机制之一。