细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析

被引：8

作者：

张静 ^{[1
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王洁 ^{[2
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王淑静 ^{[2
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张焱 ^{[2
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高岭 ^{[2
]}

赵巍 ^{[1
]}

机构：

[1] 宁夏医学院遗传学与细胞生物学教研室

[2] 宁夏医学院中心实验室

来源：

中国病原生物学杂志 | 2006年 / 04期

关键词：

细粒棘球蚴; 线粒体苹果酸脱氢酶(mMDH); 蛋白纯化; 免疫鉴定;

D O I：

10.13350/j.cjpb.2006.04.005

中图分类号：

R383.33 [];

学科分类号：

100103 ;

摘要：

目的对细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶(Eg mMDH)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性。方法对已构建的基因工程菌株mMDH/pGEM-T/JM109进行酶切,获取目的基因。将目的基因重组到pET28a表达载体上,筛选阳性表达菌株并进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定重组mMDH蛋白质为包涵体后,超声破碎细胞,尿素溶解包涵体,镍柱亲和层析法纯化,获取重组蛋白。以纯化的mMDH作抗原免疫小鼠,用Western blot和ELISA方法检测重组蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平。结果成功构建原核重组表达载体mMDH/pET28a/BL21,并纯化出浓度较高的重组蛋白。ELISA结果显示,重组抗原免疫小鼠诱导产生了一定水平的血清抗体;Western blot显示,原头蚴、囊液等天然抗原能被重组抗原免疫的小鼠血清识别。结论纯化后的重组蛋白mMDH具有较强的免疫原性,有望作为包虫病候选疫苗,值得进一步深入研究。

引用

页码：249 / 252

页数：4

共 4 条

[1] 细粒棘球蚴中国大陆株线粒体苹果酸脱氢酶基因的克隆和序列分析 [J].