人内皮细胞特异性分子-1表达载体的构建、体外表达及初步纯化

目的　探讨人内皮细胞特异性分子 1(hESM 1)表达载体的构建、体外表达及表达产物的初步纯化。方法　从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA ,用反转录 PCR扩增出hESM 1的cDNA。插入质粒 pET 2 8b中构建成表达载体 ,转化入大肠杆菌BL 2 1,经IPTG诱导表达 ,表达产物用电洗脱的方法初步纯化。结果　经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为含hESM 1的重组质粒 ,经SDS PAGE分析证实获得产物为分子量 2 3 80 8u的融合蛋白 ,表达量约占菌体总蛋白的 2 4%。结论　成功构建了重组hESM 1表达载体 ,并在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究及临床应用奠定了良好基础。