当归补血汤含药血清抑制JAK2/STAT1/3信号通路诱导人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的机制研究

目的 基于JAK2/STAT1/3信号通路探讨当归补血汤含药血清对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）增殖、凋亡的影响及机制。方法 将Wistar大鼠随机分为空白组、雷公藤多苷组(9.45 mg·kg-1)及当归补血汤高、中、低剂量组(15、7.5、3.75 g·kg-1)，连续灌胃给药7 d，制备大鼠空白血清及含药血清。将HFLS-RA细胞随机分为6组，即空白组（10%空白组大鼠血清培养基）、模型组(20 ng·mL-1TNF-α+10%空白组大鼠血清培养基)、雷公藤多苷组(20 ng·mL-1TNF-α+10%雷公藤多苷组大鼠血清培养基)，以及当归补血汤含药血清低、中、高剂量组(20 ng·mL-1TNF-α+10%当归补血汤低、中、高剂量组大鼠血清培养基)；按照分组设置加入终质量浓度为20 ng·mL-1的TNF-α,1 h后加入相应含药（或空白）血清处理24 h。采用CCK-8法检测HFLS-RA细胞增殖活性；流式细胞术（Annexin V-FITC/PI双染法）检测HFLS-RA细胞凋亡情况；RT-PCR法检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表达；ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素15（IL-15）水平；Western Blot法检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、p-JAK2、p-STAT3、p-STAT1蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组HFLS-RA细胞的增殖活性显著升高（P<0.01），细胞凋亡率明显下降（P<0.05）,IL-6、IL-15水平显著升高（P<0.01）;Bax、caspase-3 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01），而Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,Bax/Bcl-2比值显著降低（P<0.01）；细胞p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，雷公藤多苷组及当归补血汤含药血清各剂量组HFLS-RA细胞的增殖活性均显著降低（P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.05,P<0.01）,IL-6、IL-15水平均显著降低（P<0.01）;Bax、caspase-3mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01），而Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.05,P<0.01）,Bax/Bcl-2比值显著升高（P<0.01）；当归补血汤含药血清中、高剂量组HFLS-RA细胞的p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。结论 当归补血汤含药血清对TNF-α诱导HFLS-RA细胞增殖有显著的抑制作用，并可促使其凋亡，其机制可能与抑制JAK2/STAT1/3信号通路转导有关。