肠出血性大肠埃希菌O157:H7 espA基因的克隆与表达

目的通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的EspA蛋白,并分析其免疫学性质。方法采用PCR技术从EHEC O157:H7基因组中扩增espA基因,T／A法克隆,连接至pET-28a(+)载体上,转化宿主细胞E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化目的蛋白, SDS-PAGE测定其相对分子质量,同时分析其N端氨基酸序列,免疫家兔鉴定其抗原性。结果重组espA基因片段的测序结果与GenBank上基因序列只有1个碱基不同,一致性为99．83％,所编码的氨基酸序列没有改变。重组EspA蛋白在工程菌中以包涵体的形式表达,表达量约30％。免疫家兔所得抗体滴度为1:32。结论构建高效表达EspA蛋白的重组载体pET-28a(+)-espA,表达的蛋白具有良好的免疫原性,为进一步制备亚单位疫苗奠定基础。