环介导等温扩增技术检测卡氏肺孢子虫的研究

被引：12

作者：

YANG Qiu-lin

ZHANG Ru-sheng

WU He-ping

WANG Ke-geng

ZHANG Yu-kuai

机构：

[1] 衡阳

[2] 南华大学医学院寄生虫学教研室

来源：

中华微生物学和免疫学杂志 | 2008年 / 28卷 / 06期

关键词：

卡氏肺孢子虫; 检测; 环介导等温扩增技术;

D O I：

暂无

中图分类号：

R450 [];

学科分类号：

100215 ;

摘要：

目的环介导等温扩增(LAMP)技术检测卡氏肺孢子虫(Pc).方法醋酸可的松经皮下注射Wistar大鼠诱导Pc,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)提取Pc基因组DNA.设计4条扩增Pc线粒体核糖体大亚基(mtrRNA)基因的LAMP引物,以结核杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、弓形虫、大鼠白细胞为对照,进行LAMP反应.LAMP产物经显色、电泳及酶切鉴定.将Pc DNA 10倍稀释后同时进行LAMP和PCR,比较其敏感性.结果 Pc检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组均呈棕色(阴性).Pc LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,扩增产物经Tail限制性内切酶酶切鉴定正确,对照组均无扩增产物.LAMP可检测到虫体DNA的最低浓度是lP9/pJ,为PCR的10倍.结论检测Pc的LAMP方法敏感、特异及简便。

引用