利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数

被引:33
作者
杨立桃
赵志辉
丁嘉羽
张承妹
贾军伟
张大兵
机构
[1] 上海交通大学生命科学技术学院
[2] 南京农业大学动物医学院
[3] 上海市农业科学院生物技术研究中心
[4] 上海市农业遗传育种重点实验室
[5] 上海交通大学生命科学技术学院 上海南京大学生命科学学院
[6] 江苏南京
[7] 上海
关键词
植物,转基因; 稻(米); 聚合酶链反应; 基因剂量;
D O I
10.13590/j.cjfh.2005.02.014
中图分类号
S511 [稻];
学科分类号
0901 ;
摘要
为分析转基因水稻外源基因拷贝数 ,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因 (GUS和HPT基因 )和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了 14株T0 代的转基因水稻植株 ,得到了外源基因插入分别为 1、2、3和 4的转基因植株 ,同时利用SouthernBlot方法进行验证分析。随机选择 18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株 ,用SouthernBlot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数 ,SouthernBlot分析结果显示有 15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的 ,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于SouthernBlot的分析结果 ,主要原因是SouthernBlot方法在同一个插入位点有多拷贝的T -DNA片段插入时 ,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段 ,电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生 ,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。
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