抗虫工程菌在棉株内的动态变化和抗虫基因分化率研究

棉花抗虫工程菌是通过综合质粒载体，将 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ（Ｂｔ） 杀虫晶体蛋白基因 ｃｒｙＩＡ（ｃ）整合到棉花优势内生细菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ Ｂｃ９００２的染色体上构建的重组工程菌。对该工程菌的染色体酶切分析、ＰＣＲ扩增、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＥＬＩＳＡ检测、晶体毒蛋白的电镜观察和毒力测定等检测后，将其分别以３种方式（注射、喷雾、浸种）接种棉花。该工程菌在棉株内的种群数量呈现动态变化：接种２周后，菌量开始猛增，４－６周时达到最高峰约为８．８×１０８ＣＦＵ／ｇ植物组织，然后开始回落，１０周时达到接种时的菌量水平（１０３～１０4ＣＦＵ／ｇ植物组织）。工程菌在数量消长的同时，抗虫基因ｃｒｙＩＡ（ｃ）也逐步发生丢失，出现分化，其分化率（即ｃｒｙＩＡ（ｃ） 基因丢失率）为：接种２周后约为３０％，４周时约为５０％。而接种方式对工程菌的分化率影响不大，但不同接种方式和接种菌量会对工程菌株在棉株内的消长变化产生一定的影响。