茶树紫黄素脱环氧化酶基因的体外定点突变及其突变体的表达和活性鉴定

被引：6

作者：

韦朝领

江昌俊

陶汉之

宛晓春

机构：

[1] 安徽农业大学农业部茶叶生物技术重点开放实验室,安徽农业大学农业部茶叶生物技术重点开放实验室,安徽农业大学农业部茶叶生物技术重点开放实验室,安徽农业大学农业部茶叶生物技术重点开放实验室合肥,安徽农业大学农学系,合肥,合肥,合肥,合肥

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2004年 / 01期

关键词：

茶树; 紫黄素脱环氧化酶; 定点突变; 表达; 生物活性鉴定;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2004.01.015

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

经Swiss Prot蛋白质数据库中查询发现茶树紫黄素脱环氧化酶 (VDE)蛋白结构中含有lipocalin特征区 ,利用重叠延伸法把该特征区中最保守的Gly(GGG)和Trp(TGG)分别定点突变为Leu(TTG)和Tyr(TAG) .构建了表达载体pET 32a G→L和pET 32a W→Y ,在E .coliBL2 1trxB(DE3)进行了诱导表达 ,并对表达蛋白进行His Tag亲和纯化 .结果表明 ,表达蛋白的分子量和预计的相等 ,为 5 8 9kD ,表达量占菌体总蛋白的 4 5 % .体外酶促反应分析得出 ,G→L或W→Y突变都能导致茶树VDE生物活性大幅度降低 ,证明了lipocalin特征区是VDE的主要活性中心之一 .

引用

页码：73 / 78

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共 5 条

[1] 茶树紫黄素脱环氧化酶基因的cDNA克隆及其生物信息学分析 [J].