反义bcl-2和反义survivin对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生长的作用

目的　研究反义bcl 2和反义survivin(svv)对人神经母细胞瘤 (NB)细胞系SK N MC细胞生长的作用。方法　利用基因重组技术 ,采用定向克隆构建在真核细胞中能够稳定表达反义bcl 2或反义svv的逆转录病毒载体PBabepuro Asbcl 2和PBabepuro Assvv ,并分别经脂质体LipofectamineTM介导转染人NB细胞株SK N MC细胞 ,经嘌呤霉素 (2 .0 μg/ml)筛选得到抗性克隆 ,同时以空载体Pbabepuro转染SK N MC作为对照 ;以免疫组化和Western印迹分析反义bcl 2、反义svv对细胞内源性Bcl 2、SVV蛋白质的表达抑制作用 ,应用MTT法研究细胞 (5× 10 3 /孔 )的生长和增殖情况 ,并接种于裸鼠 (3只 /组 ) ,观察 10 7个细胞在 6周时的成瘤情况 ,以研究反义bcl 2、反义svv对SK N MC细胞生长的作用。结果　反义bcl 2转染后的细胞SK N MC/PBabepuro Asbcl 2中的Bcl 2表达明显降低 ,反义svv转染后的细胞SK N MC/PBabepuro Assvv中的SVV表达也明显降低 ;且这两种细胞均生长缓慢 ,裸鼠移植瘤体积均明显小于SK N MC原始细胞或转染空载体的细胞接种形成的移植瘤。结论　稳定表达的反义bcl 2、反义svv均能够有效抑制SK N MC细胞内源性相应蛋白质Bcl 2、SVV的表达 ,提示这两个基因在NB细胞的肿瘤形成中均具有一定的作用。