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分子克隆实验指南.[M].[美]萨姆布鲁克(Sambrook;J·)等 著;金冬雁等 译.科学出版社.1992,
用差异显示PCR法筛选与血管外膜细胞表型转化相关的基因
被引：9
作者：
孙爱军
高平进
刘建军
姬开达
朱鼎良
机构：
[1] 上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所,上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所上海,上海
来源：
关键词：
血管外膜;
成纤维细胞;
肌成纤维细胞;
差异显示聚合酶链反应;
反义技术;
D O I：
暂无
中图分类号：
R346 [];
学科分类号：
1001 ;
摘要：
为筛选血管外膜成纤维细胞 (adventitialfibroblast,AF)与肌成纤维细胞 (myofibroblast,MF)间表型转化有关的基因 ,实验建立了大鼠胸主动脉AF和MF两种细胞模型 ,用差异显示聚合酶链反应 (DD PCR)技术获得表达差异片段 ,对差异片段进行克隆和测序分析 ,并用定量PCR和Northernblot对差别显示结果进行验证。用反义核酸转染技术观察骨桥蛋白 (osteopontin ,OPN)对AF迁移的影响。结果表明 ,两种表型细胞存在明显的基因表达差异 ,其中一个在MF下调的差异片段与GenBank中NADH脱氢酶亚单位 5 (NADHdehydrogenasesubunit 5 ,Nd5 )基因高度同源。另一个在MF上调的差异片段与OPN基因同源。上述差异表达结果被定量PCR及Northernblot证实。此外还有 4个表达序列标志 (expressedsequence tag,EST)在GenBank中未查到同源序列。反义OPN寡脱氧核苷酸可抑制AF的迁移活动。结果提示 ,AF转化为MF可能与ND5基因下调、OPN上调及其它未知基因的表达改变有关。应用反义技术适度抑制OPN表达在防治血管重塑中具有重要作用。
引用
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