血管生长素-1基因慢病毒载体的构建及其在间质干细胞的表达

被引：11

作者：

陈柏龄 ^{[1
]}

张志坚 ^{[1
]}

黄东煜 ^{[1
]}

吴秀丽 ^{[2
]}

张彦定 ^{[3
]}

机构：

[1] 福建医科大学第一临床学院

[2] 福建省神经病学研究所,福建医科大学附属第一医院

[3] 福建师范大学生物工程学院

来源：

中国病理生理杂志 | 2007年 / 08期

关键词：

间质干细胞; 基因,Ang-1;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

摘要：

目的:构建带有血管生长素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并实现该基因在大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)中的表达。方法:RT-PCR获得大鼠Ang-1基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES2-EGFP,在脂质体介导下与包装质粒HELPER,包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒颗粒并感染rMSCs。PCR检测Ang-1基因的插入,细胞RT-PCR检测Ang-1mRNA表达,免疫细胞化学和Western blotting检测Ang-1蛋白的表达。结果:所获Ang-1基因经测序证实与GenBank报道的序列一致。慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES2-EGFP经SaⅠl和BamHⅠ双酶切后电泳显示1 512 bpAng-1目的基因片段和10.5 kb PNL-IRES2-EGFP载体片段。病毒基因组PCR证实Ang-1基因插入。荧光显微镜观察到EGFP表达。细胞RT-PCR检测到Ang-1mRNA表达。免疫细胞化学和Western blotting检测到Ang-1蛋白表达。结论:成功构建带有Ang-1基因的慢病毒载体并实现在rMSCs中的表达,为Ang-1基因修饰干细胞的应用研究奠定了基础。

引用

页码：1618 / 1622

页数：5

共 6 条

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