套式结核菌基因扩增试验的建立及初步应用

根据结核菌（Ｍｔｂ）之ｇｒｏＥＬ基因序列中发现的有特异性顺序设计的外引物及内引物建立了套式Ｍｔｂ基因扩增试验（Ｍｔｂ－ＮＰＧＡＡ）。用顺序１０倍稀释Ｍｔｂ菌悬液法显示Ｍｔｂ－ＮＰＧＡＡ敏感度达１条菌／ｍｌ，并能完全重复。在试验用的１３株分支杆菌中，在３４４ｂｐ处Ｍｔｂ出现了阳性扩增带。方法引物可以合成，试剂及仪器全部国产，整个实验６～８小时可以完成，这些结果表明Ｍｔｂ－ＮＰＧＡＡ是一种高度敏感、特异和能获得满意结果的和有望普及推广的Ｍｔｂ检测技术。当用ＮＰＧＡＡ检测以往皮肤病人皮损分离的抗酸菌培养物时，这些培养物显示与标推Ｍｔｂ有相同阳性ＤＮＡ扩增模型。此外尚对菌体ＤＮＡ释放条件，抗酸菌分离培养标本处理等问题作了讨论。