嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的纯化及特性分析

为阐明嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的性质及其在致病过程中的作用,试验以我国分离的嗜水气单胞菌J-1株为研究对象,纯化了其弹性蛋白酶,并对该酶进行热稳定性、蛋白酶抑制剂抑制作用、金属离子影响和致病性等特性分析。结果表明,嗜水气单胞菌J-1株的培养上清经35%60%硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析,可获得纯化的弹性蛋白酶,SDS-PAGE显示单条带,相对分子质量约38000。该酶对热稳定,EDTA可抑制其活性,PMSF对其无影响,金属离子铜、锌、钴等抑制其活性,说明此酶属于热稳定金属蛋白酶。腹腔注射纯化的弹性蛋白酶能致死小鼠,其对小鼠的LD50为6.4μg（0.2mL）,表明该酶是一种直接致病因子。