目的建立HPLC法测定两性霉素B含量及相关物质。方法色谱柱:C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:5.0mmol/LEDTA∶乙腈∶甲醇(30∶25∶60);流速:1.0ml/min;检测波长:405nm;柱温:30℃。结果两性霉素B含量在12~28μg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9998,平均回收率为99.9%。两性霉素B相关物质在浓度为0.08~0.49μg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9995;平均回收率为100.4%;最低检测浓度为4.10ng/ml,最低定量浓度为14.32ng/ml。结论本方法简单、准确,重现性、分离效果好,能较好两性霉素B含量和相关物质的测定。