RNAi沉默Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的抑制

被引:17
作者
范钰 [1 ]
张尤历 [1 ]
李华 [2 ]
许则丰 [3 ]
郑树 [3 ]
机构
[1] 江苏大学附属医院消化科
[2] Department of Pharmacology and Toxicology,DartmouthMedical School,Dartmouth College
[3] 浙江大学肿瘤研究所
关键词
结肠肿瘤; 基因,Cripto; RNA干扰; siRNA; 血管内皮生长因子;
D O I
暂无
中图分类号
R735.35 [];
学科分类号
摘要
目的:研究Cripto基因对结肠癌细胞血管内皮生长因子的影响。方法:设计合成针对Cripto基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染结肠癌LS-174T细胞。细胞分4组:空载对照组(对照组)和不同浓度(3.125、6.25和12.5 nmol/L)的siRNA组。分别于转染24、48、72 h后收集细胞,以实时定量PCR检测结肠癌细胞CriptomRNA,分别采用Northern blotting和免疫荧光标记法检测癌细胞VEGF mRNA和蛋白表达。分别收集转染72 h的12.5 nmol/L组和对照组细胞,接种于裸鼠背部。30 d后处死裸鼠,收集裸鼠肿瘤组织,对组织VEGF进行免疫组化染色,计算染色平均强度。结果:实时定量PCR检测显示,转染组CriptomRNA被有效地抑制,且呈浓度和时间依赖性。转染组细胞VEGF蛋白和mRNA明显低于对照组。裸鼠肿瘤免疫组化分析显示,转染组VEGF平均染色强度明显低于对照组。结论:Cripto基因参与了结肠癌组织血管生成的调控。采用siRNA下调Cripto基因表达,可抑制结肠癌组织血管生成。
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