应用Dot-ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用差速离心结合琼脂糖凝胶层析纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）制备抗原免疫兔，获得高效价的多克隆免疫血清，提纯ＩｇＧ后用辣根过氧化物酶标记，建立了检测ＩＢＶ的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）方法。对影响本方法因素的研究表明，当酶标抗体作１：１００稀释、工作时间为３７℃、６０ｍｉｎ时结果最理想；对待检组织用氯仿处理、对硝酸纤维素膜用０．３％Ｈ２Ｏ２处理３０ｍｉｎ可有效地消除组织内过氧化物酶的影响。该方法具有较强的特异性和敏感性，对病毒的最低检出量为０．０１２４ｍｇ／ｍＬ。本法不仅可检测到纯化ＩＢＶ，而且可直接用于检测鸡胚尿囊液或病变组织（如气管、肾）中的病毒；对临床上疑似ＩＢＶ感染的病鸡的阳性检出率达７８．６％，而病毒分离率仅达６０％，两者符合率为９０％。试验结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ可作为ＩＢＶ早期诊断的方法，具有简单、快速、样品用量少等优点。