蚯蚓溶栓酶基因的克隆及非融合性表达

目的　克隆和表达我国特有的双胸蚓属蚯蚓 (Lumbricusbimastus)体内一种具有纤溶活性的蛋白质。方法　通过蛋白质N 末端测序、引物设计及合成、RT PCR得其对应的cDNA ,随后构建了 pBV2 2 0 P3 0 重组质粒 ,在大肠杆菌DH5α中进行非融合性表达 ,再经亲和色谱柱纯化复性 ,得到重组蚯蚓溶栓酶蛋白。结果　克隆cDNA全长 888bp ,编码含 2 4 2个氨基酸的成熟肽 ,SDS PAGE电泳显示分子量在 30× 10 3 左右 ,因此将其命名为P3 0 ,经活性测定 ,具有纤溶活性。结论　P3 0 为首次发现的新基因 ,在国际基因库的输入号为GenebankAF 10 96 4 8,并获得国家专利 ,专利号为 9810 2 2 5 7.X。