用 MTT 比色分析法检测牛白细胞介素-2的研究

以伴刀豆蛋白 A（Con A）活化的牛外周血单个核细胞（PBM）作应答细胞,对四甲基偶氮唑盐（MTT）比色分析法检测牛白细胞介素-2（IL-2）的各项参数作了系统探讨,首次建立了检测牛 IL-2的 MTT 比色分析法。结果表明,活化应答细胞时的细胞密度以2.5～5×10～6个/ml、Con A 浓度以12.5μg/ml、活化时间以48～72小时为宜;MTT 比色分析的最适条件为:应答细胞密度1～2×10～5个/孔,α-甲基-D-甘露糖苷（α-mM）终浓度为12.5mg/ml,样品与应答细胞作用时间为36～48小时,MTT 用量为50μg/孔,MTT 作用时间为2.5小时,结果证明,本方法可检出少至390个活应答细胞、0.03个单位（U）的重组人 IL-2（rhIL-2）和2-5稀释的含牛 IL-2培养上清.本方法避免了传统3H-胸腺嘧啶核苷（TdR）掺入法的诸多不便,是一种方便、敏感、可靠和安全的牛IL-2检测法.